patojen arşivleri - Redo Analyzer

vegetables-573958_1920-1280x889.jpg

Gıdalarda veya gıda ile temas eden yüzeylerde mikroorganizmaların tespiti ve sayımı, herhangi bir kalite kontrol veya kalite güvence planının ayrılmaz bir parçasını oluşturur. Gıdalar üzerinde yapılan mikrobiyolojik testler iki türe ayrılabilir:

  • Numunedeki bir grup mikroorganizmanın sayıldığı ve sonucun numunenin birim ağırlığı başına mevcut organizma sayısı olarak ifade edildiği nicel veya sayısal

Veya;

(b) gereksinimin basitçe bilinen bir numune ağırlığında belirli bir organizmanın bulunup bulunmadığını tespit etmek olduğu niteliksel veya mevcudiyet/yokluk.

Gıdalardaki mikroorganizmaların test edilmesi için kullanılan yöntemlerin temeli çok iyi yapılandırılmıştır ve bir gıda örneğinin, içinde mikroorganizmaların çoğalabileceği ve böylece görsel bir büyüme göstergesi ile sonuçlanabileceği bir besin ortamına dahil edilmesine dayanır. Bu tür yöntemler basit, uyarlanabilir, kullanışlı ve genellikle ucuzdur. Bununla birlikte, bunların iki dezavantajı vardır: birincisi, testler ortamdaki organizmaların büyümesine dayanır. Bu da günler alabilir ve uzun bir test süresine neden olabilir; ve ikinci olarak, yöntemler elle yönlendirilir ve bu nedenle emek yoğundur.

Son yıllarda, hızlı ve otomatikleştirilmiş mikrobiyolojik yöntemler üzerine önemli araştırmalar yapılmıştır. Yeni yapılan analizlerin amacı ise bu testleri azaltmak olmuştur. Mikroorganizmaları tespit etmek ve/veya saymak için büyüme dışındaki yöntemleri kullanarak süreyi aşmak ve yöntemleri mümkün olduğunca otomatikleştirerek testlere manuel girdi düzeyini azaltmak temel hedeftir. Bu hızlı ve otomatik yöntemler, gıda endüstrisinde bir miktar kabul ve uygulama kazanmıştır. Mikrobiyoloji yöntemleri, Kalite Kontrol (QC) için temeldir, ancak gıda güvenliğine yönelik bir Kalite Güvencesi (QA) yaklaşımına doğru amansız bir hareketle, pek çok karalamanın asıl nedeni olmuştur. Bununla birlikte, mikrobiyolojik testler, tüm sınırlamaları ile bile, uygulama ve vurguda bir değişiklik olsa da, bu güvencenin bir parçası olarak artık temel bir araç olarak görülmektedir.

QC ve QA, güvenliği sağlamak için iki farklı yaklaşımdır; her iki sistem de araçları paylaşır, ancak vurgu çok farklıdır. Her iki yaklaşım da meşrudur ancak tamamen farklı organizasyonlara, yapılara, becerilere, kaynaklara ve çalışma biçimlerine ihtiyaç duyarlar. QC, dış dünyadaki baskılardan etkilenen reaktif bir yaklaşımdır. Bir QC organizasyonunda vurgu, sağlam ve istatistiksel olarak ilgili olması gereken ölçüm üzerindedir ve odak noktası yasal ve ticari konulardır. Buna karşılık, QA, şirketin dahili standartları tarafından yönlendirilen önleyici bir yaklaşımdır. Sağlam olması ve düzenli olarak gözden geçirilmesi gereken operasyonel prosedürlere vurgu yapılır ve odak noktası tüketicidir.


meal-2834549_1920-1280x814.jpg

Dünya genelinde gıda güvenliği her zaman önemli bir konudur. Gıda kalitesi ve güvenliği, gıdanın gıda kaynaklı hastalıkları önleyecek şekilde işlenmesini, hazırlanmasını ve depolanmasını kapsar. Gıda kalitesi, küresel gıda ticaretini genişletmede de daha büyük bir önem kazanmaktadır. Tüm gıda endüstrisi, bir patojenin tespit edilememesinin korkunç bir etkiye yol açabileceği bildiğinden, patojenik mikroorganizmaların varlığıyla ilgilenmektedir ya da zorundadır.

Gıda güvenliği genel olarak sürekli olarak iyileşmiş olsa da, ilerleme düzensizdir ve birçok ülkede mikrobiyal kontaminasyon, kimyasallar ve toksinlerden kaynaklanan gıda kaynaklı salgınlar yaygındır. Uluslararası Dünya Ticaret Örgütü istatistikleri (WTO, 2007), gıdanın tarımsal ihracatın %80’ini temsil ettiği, Avrupa’nın dünya tarım ürünleri ihracatının %46’sını oluşturduğunu bildirdi. Ülkeler arasında kontamine gıda ticareti, salgın potansiyelini artırmakta ve sonuç olarak gıdalardaki mikrobiyal patojenlerin oluşturduğu sağlık riskleri tüm hükümetler için büyük endişe kaynağı olmaktadır. Kasım 2007’de, ABD Gıda ve İlaç Dairesi (FDA), gıdaların kasıtlı kontaminasyon için potansiyel bir araç olarak görülmesi gerektiğinin belirtildiği kapsamlı bir ‘Gıda Koruma Planı’ geliştirdi (FDA, 2007). Gıdanın bu tür kasıtlı kontaminasyonu, insan veya hayvan hastalıkları ve ölümlerinin yanı sıra ekonomik kayıplara neden olabilir.

Gıda maddeleri için mikrobiyolojik kriterlere ilişkin Avrupa Birliği mevzuatında, 2073/EC Sayılı Yönetmelikte (EC) belirtildiği üzere “gıda maddelerinin insan sağlığı için kabul edilemez bir risk teşkil edecek miktarlarda mikroorganizmaları veya bunların toksinlerini veya metabolitlerini içermemesi gerektiği” bildirilmiştir. Son zamanlarda, Dünya Sağlık Örgütü (WHO), 15 Haziran 2007’de yürürlüğe giren 23 Mayıs 2005’te Uluslararası Sağlık Tüzüğü’nü (UST) kabul ederek uluslararası öneme sahip halk sağlığı acil durumları için küresel bir sürveyans sistemi kurmuştur (WHO, 2005).

Gıda kaynaklı patojenler

WHO, gıda kaynaklı hastalıkları, vücuda gıdanın yutulması yoluyla giren etkenlerin neden olduğu, genellikle bulaşıcı veya doğası gereği toksik olan hastalıklar olarak tanımlamaktadır. Sadece 2005 yılında 1,8 milyon kişinin ishalli hastalıklardan öldüğü ve bu vakaların büyük bir kısmının gıda ve içme suyunun kontaminasyonuna bağlanabileceği bildirilmiştir (WHO, 2007b). Sanayileşmiş ülkelerde, her yıl gıda kaynaklı hastalıklardan mustarip nüfusun yüzdesinin %30’a kadar çıktığı bildirilmiştir.

Örneğin, Hastalık Kontrol ve Önleme Merkezleri (CDC, 2005), Amerika Birleşik Devletleri’nde her yıl yaklaşık 76 milyon gıda kaynaklı hastalık vakasının 325.000 hastaneye yatış ve 5000 ölümle sonuçlandığını tahmin etmektedir. Çeşitli gıda kaynaklı hastalıklar iyi bilinmektedir, ancak son zamanlarda daha yaygın hale geldikleri için riskli yükseliş olarak işaretlenmiştir. Gıda kaynaklı hastalıklar için tanımlanmış çeşitli gıda kaynaklı patojenler olmasına rağmen, Campylobacter, Salmonella, Listeria monocytogenes ve Escherichia coli O157:H7’nin genellikle gıda kaynaklı salgınların çoğundan sorumlu olduğu bulunmuştur. Ayrıca, daha önceki ve son zamanlardaki gıda ürünü geri çağırmalarının çoğu bu patojenlerden kaynaklanmaktadır.


bacteria-426997_960_720.jpg

 Gıda kaynaklı patojenler, dünya çapında çok sayıda hastalığa ve ölüme neden oldukları için gıda güvenliğinde en dikkate değer biyolojik tehlikedir. Konvansiyonel yöntemler, seçici besiyeri üzerinde zenginleştirme ve izolasyon yoluyla gıda patojenlerini tespit eder. Kolonilerin spesifik morfolojisi tanınabilir, ancak olası pozitif kültürlerin doğrulanması ve tanımlanması müteakip serolojik ve biyokimyasal testleri gerektirir. Örneğin, belirli bir Salmonella serovarını tanımlamak için en az üç antikor-antijen reaksiyonu gerçekleştirilir. Bu zahmetli yöntemlerin tamamlanması birkaç gün sürer (örneğin Campylobacter için 4-8 gün). Ayrıca, çeşitli patojenlerin, türlerin ve olası eşzamanlı varlığı serotipler, gıda ürünü başına gereken tahlil sayısını artırır.

Ancak moleküler teknikler gıda mikrobiyolojisinde devrim yaratmaktadır. Son birkaç on yılda, araştırma topluluğu, bir bakteri popülasyonundaki farklı soylar ve alt soylar için spesifik proteinleri ve genleri tanımlayarak gıda kaynaklı patojenlerin moleküler parmak izi hakkında bilgi edinmektedir. Özel olarak, DNA genellikle kendisini taşıyan hücrenin fizyolojik durumundan ve gıda depolama ve işleme sırasında karşılaşılan koşullardan bağımsız olarak saptanabilecek kadar stabildir. Sonuç olarak, gıda mikrobiyolojisinde DNA temelli yöntemler, özellikle PCR yöntemleri büyük ölçüde büyümüştür. Teşhisler çok faydalıdır çünkü canlı bir hücre veya bir protein antijeni yerine bir DNA hedefinin varlığını tespit edebilirler. Bu nedenle, dezenfeksiyon yöntemlerini hedeflenen mikroorganizmalara göre uyarlamak ve tüketicilerin kontamine gıdaları doğrudan veya çapraz kontaminasyon yoluyla tüketme riskini en aza indirmek için kontroller giderek daha fazla uygulanmaktadır. Bu bağlamda, izotermal amplifikasyon yöntemleri, mikrobiyolojik kültürlere rekabetçi bir alternatiftir ve en iyi performansları nedeniyle PCR tabanlı yaklaşımların yerini almaktadır.

Sonuçlar daha basit, daha hızlı ve daha esnek bir şekilde elde edilir. Yayınlanmış çalışmalar açısından, daha fazla ilerlemeye son iki senaryoda yapılmıştır. LAMP kullanımını tanımlayan makalelerin sayısı, diğer tüm amplifikasyon yöntemlerine kıyasla çok fazladır.

LAMP teknolojisini kullanan ilk çalışmalar Salmonella tespitine odaklanmıştır. Şu anda, her yıl 200’den fazla makale yayınlanmaktadır. Gıda mikrobiyolojisi uygulamaları için LAMP’ın başarısını açıklamak için birkaç makul neden vardır. İlk olarak, LAMP mükemmel performans sunar; örneğin, bir karşılaştırma çalışması LAMP’nin PCR testlerine kıyasla 10 ila 100 kat daha duyarlı olduğunu göstermiştir.

İkincisi, LAMP primerleri, birkaç gen hedefi için özel olarak tasarlanabilir. Bu nedenle patojen belirteçleriyle yapılan ilerlemeler hızla amplifikasyon teknolojilerine dahil edilir. Diğer bir faktör, tekniğin biyosensörlere ve mikro cihazlara entegre edilecek esnekliğidir. Bilim insanları, nükleik asit saflaştırması, amplifikasyonu ve çevrimiçi saptama için entegre bir cam mikro cihaz önermektedir. Birden fazla patojen kantitatif tespit bir polimer mikro-akışkan çip kullanılarak ayarlanmıştır. Bir başka grup ise, 10 patojenik bakterinin hızlı ve eşzamanlı tespiti için bir mikroakışkan disk çipine (çip üstü LAMP) entegre edilmiş gerçek zamanlı bir florojenik LAMP tahlili geliştirdi. Hızlı ve kantitatif analizler için entegre numune hazırlama ile LAMP tabanlı bir çip üzerinde laboratuvar sistemi geliştirdi.

Çoğu çalışma, insanlarda gıda yoluyla kolayca bulaşan patojenik bakterileri tespit edebilmektedir. Gıda kaynaklı başlıca bakteriler Campylobacter, Salmonella, Escherichia coli (özellikle serotip O157:H7), Enterobacter sakazakii (veya Cronobacter), Vibrio parahaemolyticus, Listeria monocytogenes ve Staphylococcus aureus bunlardan bazılarıdır. Diğer amplifikasyon teknikleri ile ilgili olarak, canlı gıda kaynaklı patojenlerin tespiti, klinik örneklerle karşılaştırıldığında zar zor rapor edilmiştir. Mikrodizi ve DVD saptama teknolojisiyle ve enzime bağlı bir immünosorbent deneyi olarak birlikte kullanım için uygun bir multipleks DNA bazlı hedef amplifikasyon yöntemi geliştirilmiştir. Salmonella ve Cronobacter tespiti için önerilen RPA yöntemleri uygulanmıştır. Ek olarak, DVD yüzeyinde doğrudan amplifikasyonlar için, benzer tespit limitleriyle, ancak analiz süresini, numune manipülasyonunu ve reaktifi kesen tek kap formatı geliştirilmiştir.


İletişim

Göztepe Mah. İstoç İkinci Cad. No: 1 Kat : 4 İç Kapı no : 42 BURAK PLAZA Bağcılar / İSTANBUL
+90 (544) 930 70 90

+90 (212) 599 18 19

+90 (212) 599 18 13

info@analyzer.com.tr

Bizi Takip Edin

Bizi sosyal medya platformlarından da takip edebilirsiniz.